نویسنده
مهاجرت و تهاجم سلولی هم در فیزیولوژی طبیعی و هم در بیماری ها نقش اساسی دارد. به این علت، روشهایی برای ارزیابی مهاجرت سلولی و تهاجم سلولی در فرآیندهای طبیعی سلولی و مکانیسمهای بیماری ها ضروری می باشد . در اینجا، ما روش متداول transwell در شرایط آزمایشگاهی را برای مطالعه مهاجرت و تهاجم سلولی شرح می دهیم.
سنجش مهاجرت transwell شامل کموتاکسی سلول ها از طریق یک غشای متخلخل پس از ایجاد یک گرادیان شیمی-جذب کننده (chemotaxis) در محیط می باشد. روش سنجش تهاجم (Transwell assay) شامل افزودن یک ماتریکس خارج سلولی در بالای غشای متخلخل است که تنها به کموتاکسی سلول هایی که دارای خواص تهاجمی مانند سلول های تومور هستند اجازه عبور می دهد.
مهاجرت سلولی در سلول هایی مانند لکوسیت ها، سلول های بنیادی، فیبروبلاست ها و سلول های توموری در انواع فرآیندهای فیزیولوژیکی و پاتوفیزیولوژیکی دخیل هستند. به این ترتیب، سنجش مهاجرت و تهاجم سلولی به طور گسترده ای مورد استفاده قرار گرفته و تأثیر قابل توجهی در زمینه های زیست شناسی و زیست پزشکی داشته است.
سنجشهای متعددی برای ارزیابی مهاجرت یا پاسخ کموتاکتیک به سمت یک ماده ی شیمیایی جاذب مانند کموکاینها، لیپیدهای زیست فعال یا فاکتورهای رشد وجود داشته و توسعه یافتند.
در اینجا، روشهای مهاجرت و تهاجم که به طور گسترده مورد استفاده قرار می گیرند را بیان میکنیم که شامل دو محفظه پر از حفره (chamber) است که توسط یک غشای متخلخل تقسیم میشوند. محیط حاوی عامل مواد شیمیایی جاذب به محفظه پایینی اضافه میشود و سپس سلولها در محفظه بالایی کشت میشوند تا یک گرادیان شیمی-جذب کننده برای مهاجرت سلولی جهت دار ایجاد شود. پس از انکوباسیون، میزان کموتاکسی سلولی را می توان با تعیین کمیت سلول های چسبنده که به سمت پایه غشای متخلخل مهاجرت کرده اند، ارزیابی کرد. علاوه بر این، مهاجرت سلولهای غیرچسبنده به محفظه پایینی را می توان اندازهگیری کرد. برای سنجش مهاجرت و تهاجم ، افزودن یک لایه ماتریکس خارج سلولی در بالای چاهک متخلخل، امکان بررسی تهاجم و مهاجرت سلولی را فراهم می کند.
روش کار